【试剂简介】

英文名：Desthiobiotin-PNB ester

中文名：脱硫生物素-PNB酯

【结构特点与作用机制】

1.脱硫生物素骨架

与天然生物素相比，脱硫生物素缺失了四氢噻吩环上的硫原子。这一改变使得脱硫生物素与亲和素（avidin）或链霉亲和素（streptavidin）的结合亲和力降低（平衡解离常数 Kd 约在 10⁻¹¹ 至 10⁻¹⁰ M 级别，而生物素与链霉亲和素的 Kd 约 10⁻¹⁵ M）。较低的结合亲和力为该标记体系提供了可逆洗脱的基础。

2.PNB 保护基团

对硝基苄基（PNB）通过酯键连接于脱硫生物素的羧酸末端。该保护基团可在特定条件下（如紫外光照或化学还原）被移除。移除前，PNB 酯结构阻止脱硫生物素与亲和素结合；移除后，游离的脱硫生物素羧基重新暴露，恢复其与亲和素的特异性结合能力。

3.光解或化学裂解特性

PNB 酯在 350–365 nm 紫外光照射下可发生光解反应，释放出游离的脱硫生物素。同时，某些还原条件（如连二亚硫酸钠处理）也可去除 PNB 基团。用户可根据实验体系选择适宜的触发方式。

【试剂信息】

分子式：C16H21N3O5

分子量：335.36

货号：Y-JL-0020

结构式：

纯度标准：≥95%

包装规格：10mg，25mg，50mg （灵活性，可按需定制）

外观颜色：白色固体

供应商：陕西新研博美生物科技

溶解条件：溶于水以及部分有机溶液

稳定性：需要在-20℃以下的环境中冰冻、干燥、避光保存

【主要应用方向】

1. 可逆的亲和纯化

在目标分子（如蛋白质、核酸或小分子）上标记脱硫生物素后，可将其吸附于链霉亲和素固相介质（如琼脂糖珠或磁珠）。由于结合力低于生物素，后续使用含有游离脱硫生物素的缓冲液（例如 2–5 mM 脱硫生物素溶液）或温和的酸性缓冲液（pH 4.0–5.0）即可将目标分子洗脱，避免使用强变性剂（如 8 M 尿素或 0.1% SDS）或煮沸处理。PNB 保护基团的存在允许在标记反应阶段暂时屏蔽脱硫生物素的结合能力，待需要纯化时再激活。

2. 光控亲和标记

PNB 基团的光敏感性允许对标记过程进行时空控制。例如，在细胞裂解液或活细胞体系中，首先将 Desthiobiotin-PNB ester 与目标分子共价连接（通过酯键与伯胺反应），此时脱硫生物素处于“封闭”状态，不会与体系内源性亲和素或外加的链霉亲和素结合。当实验者选择特定时间点或特定区域（如微流控芯片或显微镜视场中的指定区域）施加紫外光照射后，PNB 脱离，脱硫生物素被激活，可立即被链霉亲和素捕获。这一策略适用于研究动态蛋白相互作用或信号通路中的时序事件。

3. 与生物素-亲和素体系的兼容性

脱硫生物素与生物素均可结合链霉亲和素上的同一位点，但脱硫生物素的结合可被游离脱硫生物素竞争性置换，而生物素一旦结合则很难置换。因此，在已使用生物素标记的实验体系中，脱硫生物素标记物可用于后续温和洗脱步骤，而不干扰初始的生物素-链霉亲和素结合。

【相关试剂】

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【注意事项】

1.产品仅限用于科研实验，不用于临床和诊疗。

2.在使用过程中，也需要避免频繁解冻，保持干燥、避光和避氧气。

文章编辑来源：陕西新研博美生物科技WWH